tissuelyser組織研磨機對提取小鼠尾巴RNA的實(shí)驗步驟

實(shí)驗步驟

1、首先將上海凈信的組織研磨儀上的制冷模塊預先置于適當的溫度下，使用時(shí)取出安裝好。將研磨珠去RNA酶處理。

2、隨機抽取小鼠的尾巴，把樣本剪成盡可能小段，置于無(wú)RNA酶的離心管中（選擇耐液氮冷凍管子），同時(shí)加入幾顆研磨珠。

3、放置于液氮中一起浸泡幾分鐘，取出放置于預冷模塊中，在全自動(dòng)樣品研磨儀上選擇合適的研磨時(shí)間和研磨頻率。（該步驟可以根據研磨的細微程度要求可以再重復一遍）

4、把研磨好的樣本加入的PBS和RNAiso Plus（此處選擇PBS，可以根據實(shí)驗需要加入其他提取液，如TRIzol等），繼續置于研磨機上選擇合適的研磨時(shí)間和研磨頻率。樣本將處于糊狀。（其他提取試劑有可能會(huì )出現泡沫，不影響實(shí)驗）

5、取出研磨管，放入冷凍離心機中，選擇適當的溫度進(jìn)行離心幾分鐘。

6、小心吸取上清液至新的離心管中，蓋上管蓋，在室溫上孵育十幾分種，使樣品充分裂解至勻漿液較透明，如果仍有少量顆粒屬于正常情況，不影響RNA提取質(zhì)量和得率。

7、在離心管中加入氯仿，蓋緊管蓋，振蕩混勻并將其在冰上孵育幾分種，選擇適當的溫度進(jìn)行離心幾分鐘。離心后混合物分層：上清層，中間層，下層；RNA存在于上清層中。

8、將上清層小心轉移到一干凈的離心管中，加入等體積冰浴的異丙醇，顛倒振蕩混勻，將混合的樣品在適當的溫度條件下，孵育幾分種，選擇適當的溫度進(jìn)行離心幾分鐘。RNA沉淀通常形成片狀沉淀附著(zhù)于管壁或管底。

小心棄去上清，用冰浴的乙醇洗滌RNA沉淀一次，顛倒洗滌離心管管壁，并旋渦振蕩樣品，盡可能讓沉懸浮，選擇適當的溫度進(jìn)行離心幾分鐘，再次去除上清，晾干沉淀。

10、操作的最后，在陰涼處適度干燥RNA沉淀（避免過(guò)分干燥，那樣會(huì )降底它的可溶性）。

11、用適量的無(wú)RNA酶水或TE溶液來(lái)溶解RNA。抽提好的RNA，保存于適當的溫度下。